Die wichtigste Kunstsammlung Italiens und eine der reichsten der Welt befindet sich in Vasaris majestätischem Uffizi-Palast und beherbergt die Kunstsammlung der Medici, die der Stadt Florenz 1737 unter der Bedingung geschenkt wurde, dass sie die Stadt niemals verlassen solle.
Der eindrucksvolle Querschnitt italienischer, insbesondere florentinischer Kunst wurde so angeordnet, dass er den Einfluss der sich entwickelnden Techniken und Ideen auf die Künstler hervorhebt. Die riesige Sammlung ist wirklich zu groß, um sie auf einmal zu bewältigen. Besucher mit nur wenig Zeit sollten aber unbedingt einen Blick in die Säle 7-18 werfen, in denen sich einige der größten Attraktionen der Stadt befinden, u. a. Botticellis mythologische Meisterwerke "Geburt der Venus" und "Der Frühling" und Leonardo da Vincis "Verkündigung".
Die Kunst des Mittelalters bildet unter den frühen Werken einen Schwerpunkt, besonders die Schule von Siena, die vor allem von Duccio, Martini und Giotto verkörpert wird. Im hinteren Teil der Galerie werden Werke der umbrischen und venezianischen Schulen gezeigt, u. a. Tizian, Tintoretto und Raphael.